瑞德肝脏疾病研究（上海）有限公司

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测试物对肝脏药物代谢酶CYP450时间依赖性抑制作用的体外研究（人肝微粒体，7个亚酶，8个底物，IC50偏移法）

发布时间：2021-04-01 16:44 |  点击次数：

 
试验5B：测试物对肝脏药物代谢酶CYP450时间依赖性抑制作用的体外研究（人肝微粒体，7个亚酶，8个底物，IC50偏移法）
目的：采用IC50偏移法评价测试物的代谢产物对CYP450的7个主要的亚酶的时间依赖性抑制作用，即非可逆性抑制作用，进而评价人体中可能的代谢性相互作用。  
测试物数目： 1
测试系统：人肝微粒体 1
测试酶系（代谢产物）：
CYP1A2: Phenacetin O-deethylation\ CYP2B6: Bupropion-hydroxylation\ CYP2C8: Amodiaquine N-deethylation\ CYP2C9 : Diclofenac 4'-hydroxylation\ CYP2C19: S-Mephenytoin 4'-hydroxylation\ CYP2D6: Dextromethorphan O-demethylation\ CYP3A4: Testosterone 6β-hydroxylation and Midazolam 1-hydroxylation		 8
测试浓度：5个，根据化合物药效剂量下的血药浓度、溶解度、预期肝浓度、直接抑制IC50等数据确定 5
样本量：三个重复样本（包括对照组） 3
孵育条件：
  • 微粒体蛋白浓度：0.5-1 mg/mL
  • NADPH浓度：1.0 mM
  • 温度：37.0 oC
  
孵育过程：
  • 不同浓度测试物分别与人肝微粒体在添加和不添加辅酶NADPH条件下预孵育30分钟后，加入CYP450个亚酶的探针底物，继续孵育5-30分钟；不含有测试物的溶剂组作为阴性对照组（NC）。
  
评价参数：
  • 代谢产物生成相对量
  • 相对活性（% of NC）=测试组的代谢产物生成相对量/ NC组的代谢产物生成相对量×100
  • 半数抑制浓度（IC50）Y=100/(1+10^((X-LogIC50)))，通过软件 GraphPad Prism 计算。
  • Shifted IC50 = IC50（30min pre-incubation -NADPH）/ IC50（30 min pre-incubation +NADPH）
  
试验周期：20个工作日