瑞德肝脏疾病研究（上海）有限公司

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测试物对肝脏药物代谢酶CYP450直接抑制作用的体外研究（人肝微粒体，7个亚酶，8个底物）

发布时间：2021-04-01 16:43 |  点击次数：

 
试验5A：测试物对肝脏药物代谢酶CYP450直接抑制作用的体外研究（人肝微粒体，7个亚酶，8个底物）
目的：研究测试物对CYP450的7个CYP450亚酶的直接抑制作用，即潜在的可逆抑制作用，进而评价人体中可能的代谢性相互作用。  
测试物数目： 1
测试系统：人肝微粒体 1
测试酶系（代谢产物）：
CYP1A2: Phenacetin O-deethylation
CYP2B6: Bupropion-hydroxylation
CYP2C8: Amodiaquine N-deethylation
CYP2C9: Diclofenac 4'-hydroxylation
CYP2C19: S-Mephenytoin 4'-hydroxylation
CYP2D6: Dextromethorphan O-demethylation
CYP3A4: Testosterone 6β-hydroxylation
CYP3A4: Midazolam 1-hydroxylation		 8
测试浓度：5个，根据化合物药效剂量下的血药浓度、溶解度、预期肝浓度等数据确定 5
样本量：三个重复样本（包括对照组） 3
孵育条件：
  • 微粒体蛋白浓度：0.5 mg/mL
  • NADPH浓度：1.0 mM
  • 温度：37.0 oC
  
孵育过程：
  • 测试物与人肝微粒体孵育15分钟后，加入NADPH和CYP450的底物，继续孵育30分钟
  
试验和对照组：
  • 阴性对照（NC）：孵育体系中不含有测试物，含CYP450底物和辅酶NADPH。
  • 阳性对照（PC）：孵育体系中含有各个亚酶的抑制剂，CYP450底物和辅酶NADPH。
  • 各亚酶的抑制剂如下：CYP1A2：Furafylline；CYP2B6：Thiotepa；CYP2C8：Quercetin；CYP2C9：Sulfaphenazole；CYP2C19：Ticlopidine；CYP2D6：Quinidine；CYP3A4：Ketoconazole。
  
评价参数：
  • 代谢产物生成相对量
  • 相对活性（% of NC）=测试组的代谢产物生成相对量/ NC组的代谢产物生成相对量×100
  • 半数抑制浓度（IC50）Y=100/(1+10^((X-LogIC50)))，通过软件 GraphPad Prism 计算。
  
试验周期：20个工作日